【干貨】胎牛血清的使用方法，你都了解嗎？

血清是細胞培養中外源添加的成分不確定的物質，血清的質量對實驗成敗起著關鍵性作用，但血清使用不當也可能會導致血清質量下降，造成細胞培養效果不理想。今天來給大家聊聊血清使用中的一些疑惑，幫助大家理清頭緒，實驗開展順順利利。

怎樣確定血清使用濃度？

這個只能通過測試了。原則上血清添加量不要太多，通常分為5%、10%、20%幾檔。部分細胞原代提取時會使用20%血清，大部分細胞正常培養時會使用5%～10%的血清濃度。至于某一株細胞適應什么樣的血清濃度，還需要根據細胞特性、實驗目的做測試和調校。

血清使用前需要離心嗎？

這個問題我理解為兩種可能。

其一，因為血清融解后有“絮狀物"析出。如果沒有出現其他異常情況，或者血清只是用于細胞培養，那么*沒有必要離心去除。我們知道血清析出的“絮狀物"主要是血纖蛋白，其在血清中含量很高，而且高度不溶，在血清凍融過程中極易析出，但它也是*無害的，甚至能促進細胞生長。另外，它還增強了血清黏性，為細胞提供了額外的機械緩沖。在其析出過程中，會粘附培養體系中其他成分，離心去除，反而會損失營養成分。

其二，實驗要求純凈的培養體系。培養的細胞需要進一步鑒定，如免疫熒光、流式、共聚焦拍照等，細胞表面如果有黏性較強的血纖蛋白，勢必會影響效果。那么，建議400g離心5min即可。如果需要進行精密實驗，如分離外泌體等，那么就需要至少100000g離心1.5h以上

血清滅活和不滅活有什么不一樣？

在回答這個問題之前，我們先要弄清楚滅活究竟滅的是什么成分的活性。其實56℃、30min的處理只能去除補體和部分其他蛋白的活性。補體是免疫系統的一部分，在體內可通過多條途徑被激活，從而發揮調理吞噬、裂解細胞、介導炎癥、免疫調節和清除免疫復合物等多種作用。血清滅活的說法最早是在細胞培養技術發展初期，大部分實驗室還在使用小牛血清甚至成體動物血清，或者以前培養某些人源細胞時會添加人血清。因為血清供體已與環境長期接觸，體內免疫系統已經經歷了一場又一場的戰斗，而保留了“豐厚的戰利品"——抗體、補體等，這些成分在體內可以由免疫系統清除，但在體外的細胞培養中，可能會對部分細胞產生損傷。巧在人們發現這些成分不耐受高溫，所以才有了熱滅活處理。

細胞培養技術發展到今天，我們已經能把控原材料的質量。對于血清，我們會選擇胎牛來源。因為在體內有胎盤屏障的隔離，又尚未接觸體外環境，其自身免疫系統、免疫物質幾乎為零。這個時候，如果不是對血清成分的極度苛刻，再談滅活就有些多余了。甚至因為熱處理，導致血清內大量蛋白析出，同時粘附其他成分一起丟失，對細胞培養而言就得不償失了。

怎樣為您的細胞選擇合適的血清？

目前市面上的血清產品五花八門，各種品牌宣稱來自各個血源地，讓人眼花繚亂。可以確定的是，除了所謂的“水貨"，它們當中絕大多數都是質量合格的產品。但合格不一定好用，或者說適用于某一種細胞。要確定一款血清的性能，或者從眾多血清來源中挑選一款，好的辦法就是篩選驗證。

血清的篩選驗證主要包括：形態驗證、增殖能力測試和克隆形成能力測試。我們通過多次傳代，分辨同細胞、同代次、不同血清樣品培養的細胞形態間的細微差異；或者同血清樣品、不同細胞、不同代次間，細胞形態維持的情況。我們通過同一細胞多次傳代，每代接種相同細胞量，間隔相同時間后計數得到單位時間倍增數，確定增殖性能。又通過不同細胞在相同培養面積內接種相同的少量的細胞，根據形成的單克隆數量、大小，判斷血清支持克隆形成的能力。

一款血清需要綜合達到這幾個性能的高水平表現，才能稱為好血清。或者一款血清在培養某種細胞時，這幾個方面的表現都優秀，才是適用的。