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        細(xì)胞培養(yǎng)小常識(shí)

        2021-11-05 瀏覽次數(shù):1386

        1. 切記,細(xì)胞培養(yǎng)基的儲(chǔ)存條件是2-8℃。如果細(xì)胞培養(yǎng)基不小心被凍,您應(yīng)該融化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生,培養(yǎng)基可以正常使用,如果出現(xiàn)沉淀,只能丟棄這些培養(yǎng)基。
          2.貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基,可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時(shí),碳酸氫鈉導(dǎo)致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口,在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15min,來校正溶液的pH值(確定松開瓶口以保證氣體交換)。
          3.當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時(shí),降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會(huì)結(jié)合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下,抗生素不被滅活,可能對(duì)于細(xì)胞達(dá)到毒性水平。
          4.一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。
          5.總之,大部分添加物和試劑最多可以凍融3次,如果次數(shù)更多都會(huì)在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,將會(huì)影響它的性能。

          6.血清的熱滅活在免疫分析時(shí)可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。熱滅活是以往*的操作步驟,并沒有確鑿的證據(jù)說明這樣做是有益的。相反,對(duì)大部分細(xì)胞而言,GIBCO和HyClone都不推薦熱滅活血清。因?yàn)榧訜峥赡苁寡逯械某恋碓黾樱鼓`以為污染。

          7.在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí),我們強(qiáng)烈推薦進(jìn)行臺(tái)盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個(gè)簡(jiǎn)單的稀釋(1∶4或1∶2)進(jìn)行傳代,不進(jìn)行活性檢測(cè),您可能接種比你認(rèn)為的低得多的濃度的細(xì)胞,這常常可能導(dǎo)致生長(zhǎng)緩慢或培養(yǎng)物根本不生長(zhǎng)。

          8.在訂購的細(xì)胞到達(dá)后,應(yīng)立即復(fù)蘇,如果培養(yǎng)基還沒有準(zhǔn)備好,可將其放入液氮中,盡快復(fù)蘇。千萬不能放置在-20或-80℃的冰箱內(nèi)。

          9.細(xì)胞復(fù)蘇往往是比較容易出問題的步驟。請(qǐng)?jiān)谟嗁徏?xì)胞時(shí)就向供應(yīng)商索取詳細(xì)的復(fù)蘇步驟,并仔細(xì)閱讀。有些供應(yīng)商就不推薦在復(fù)蘇時(shí)離心,對(duì)此類細(xì)節(jié),應(yīng)特別留意。

          如何避免血清中沉淀物的產(chǎn)生?

          1. 解凍血清時(shí),請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。并隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。

          2. 請(qǐng)勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。

          3.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

          4.若必須做血清的熱滅活,請(qǐng)遵守56℃,30min的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。


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