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冷凍細(xì)胞活化步驟

2022-01-19 瀏覽次數(shù)：1382

1.冷凍細(xì)胞的活化原則為快速解凍，避免冰晶重新結(jié)晶對細(xì)胞造成傷害，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

2.細(xì)胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細(xì)胞生長或特性表現(xiàn)才會(huì)恢復(fù)正常(例如產(chǎn)

生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。2y2Q O6\#o&h4@+z,~

3.材料37℃ 恒溫水，新鮮培養(yǎng)基，無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶，液氮或干冰容

4.步驟：

4.1操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。

4.2自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時(shí)蓋子易

松掉。

4.3將新鮮培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)。

4.4取出冷凍管，立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化以70%ethanol擦拭保存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

4.5取出0.9ml解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)(稀釋比例1:10～1:15)混合均勻，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。另取0.1ml解凍細(xì)胞懸浮液作存活測試。

4.6解凍后是否立即去除冷凍保護(hù)劑(例如DMSO或glycerol)，依細(xì)胞種類而異，一般而言大都不需要立即去除冷凍保護(hù)劑。惟若要立即去除，則將解凍之細(xì)胞懸浮液加入含有5-10ml培養(yǎng)基之離心管內(nèi)，離心1,000rpm,5分鐘，移去上清液，加入新鮮培養(yǎng)基，混合均勻，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

4.7若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。

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