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支原體污染對細胞培養的危害！

2022-03-03 瀏覽次數：1092

1.支原體污染的普遍性

支原體污染是細胞培養領域遇到的性問題，據文獻報道，綜合美國食品藥品監督管理局（FDA）、美國模式菌種收集中心(ATCC)等機構收到的相關數據，世界各國細胞系支原體污染的平均比例為30-60%。該數據未統計中國大陸的數據，但可以確定，大陸地區的支原體污染比例與此相當，或更嚴重。

2.支原體污染的危害

根據已發表的支原體污染研究文獻，支原體污染細胞后，幾乎能影響每一個細胞參數。

1）支原體污染可能導致細胞染色體的異常和損傷，改變細胞的代謝、生長、形狀、附著。

2）支原體影響被污染細胞的基因表達。相關研究表明，支原體污染的細胞系與對照組比較，有多達200個基因表達差異達2倍以上。

3）導致MTT等細胞毒性實驗結果嚴重錯誤。支原體對MTT有額外還原作用。

4）支原體污染能耗盡營養物，促進代謝積累，重度支原體污染導致pH改變。

5）誘導或抑制細胞因子表達，并改變培養細胞的代謝、增殖特征及形態。支原體污染可以直接影響L-arginine的代謝

6）支原體污染可以誘導樹突狀細胞成熟，這對于開展人體免疫細胞的腫瘤治療的影響將是災難性的。

3.支原體污染的隱蔽性

支原體大小約0.1-0.6微米，體積比病毒稍大，輕度到中度的支原體污染不會明顯改變細胞培養液的渾濁度和pH值，也不會導致細胞形態或生長速度的明顯改變，所以科研人員很難及時發現體外培養的細胞已經被支原體污染，進而改變了基因表達譜，顯示虛假的實驗數據和實驗結果。通常情況下，如果不排除支原體污染因素，很多實驗結果往往缺乏說服力。2013年，Ding級期刊《Nature》明確要求，在涉及細胞培養的科研工作中，必須進行支原體檢測，并排除其影響。