培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物的試驗結(jié)果，而pH值又是培養(yǎng)基的重要監(jiān)控項目。這是因為微生物的生長不僅依賴豐富的營養(yǎng)，還需要一個適宜的pH環(huán)境，只有在適宜的pH環(huán)境下微生物才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性，因此培養(yǎng)基pH值是否符合要求直接影響微生物檢驗結(jié)果。在培養(yǎng)基配制過程中，滅菌過程對培養(yǎng)基pH值影響尤為重要。我們常常可以發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基在滅菌前后pH值有差異，一般滅菌后pH值都會有所下降，這是為什么呢？

滅菌的時間和溫度
在高壓濕熱滅菌時，長時間的高溫會對培養(yǎng)基產(chǎn)生很多不利的影響，例如會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)分解、營養(yǎng)成分改變以及pH值變化，進而影響微生物生長。同時還可能引起培養(yǎng)基顏色變化、透明度降低、瓊脂凝膠強度變化等。培養(yǎng)基在滅菌過程中，滅菌的溫度和時間，高壓滅菌器升溫、降溫的速率，滅菌容器的容積和裝載方式等因素都對培養(yǎng)基的滅菌有著重要影響。

培養(yǎng)基的成分
在培養(yǎng)基的配制過程中我們會發(fā)現(xiàn)，同樣的滅菌溫度和時間，同樣的體積和裝量的不同培養(yǎng)基，在滅菌后pH值變化不同，有的培養(yǎng)基pH值變化較多，有的培養(yǎng)基pH值變化較少。這是因為不同培養(yǎng)基的成分不盡相同，而不同的成分在滅菌過程中對培養(yǎng)基pH值有著不同的影響。糖類和蛋白胨是培養(yǎng)基中最常見的兩種重要成分，那么這兩種成分分別對培養(yǎng)基滅菌后pH值有著什么樣的影響呢？
糖類，例如葡萄糖、乳糖等作為碳源被微生物所利用。糖類在高溫條件下會產(chǎn)生有機酸使培養(yǎng)基pH值下降。一般情況下，培養(yǎng)基含糖量越高，滅菌后pH值下降越多。如果過度滅菌pH值變化會更加明顯。同時，糖類在高溫滅菌時容易焦化，使培養(yǎng)基顏色加深。
蛋白胨一般作為培養(yǎng)基氮源，為微生物的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)。蛋白胨在培養(yǎng)基滅菌時還能對培養(yǎng)基的pH值變化起到一定的緩沖作用。一般含胨量高的培養(yǎng)基，滅菌前后pH值變化相對較小。

另外，若培養(yǎng)基成分中含有緩沖劑，如磷酸氫二鉀等，也可以減少培養(yǎng)基滅菌前后pH值的變化。

測量pH值時的溫度
同一培養(yǎng)基在不同溫度下測得的pH值也會有一定差異，一般培養(yǎng)基的pH值會隨著測量時溫度的升高而降低。培養(yǎng)基滅菌之后未冷卻時，測量的pH值一般會偏低，這是由于溫度升高時溶液中的游離離子數(shù)增多，測得的pH值較低；反之，當(dāng)溫度降低時游離離子數(shù)減少，測得的pH值較高。通常我們在測定培養(yǎng)基pH值時，溫度控制在25℃左右。