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【產(chǎn)品介紹】

HAKATA無(wú)外泌體血清(Exosome-depleted)）是一款去除外泌體的特級(jí)血清產(chǎn)品。剔除率高達(dá)99%，同時(shí)保持了和處理前血清相同的良好的細(xì)胞生長(zhǎng)及維持功能，能夠滿足幾乎所有細(xì)胞的生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)需求，包括各種腫瘤和轉(zhuǎn)化細(xì)胞系、原代細(xì)胞、免疫細(xì)胞、部分干細(xì)胞（胚胎干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等）等。同時(shí)由于本血清中血紅蛋白和內(nèi)毒素含量水平都非常低，因此特別適合于培養(yǎng)對(duì)環(huán)境相對(duì)敏感和要求較高的細(xì)胞。適用于外泌體和細(xì)胞外囊泡、miRNA、細(xì)胞間通信等研究。

【產(chǎn)品特點(diǎn)】

1、內(nèi)毒素含量低，三次納米級(jí)過(guò)濾

2、嚴(yán)格控制批次差異

3、來(lái)源可靠、可溯源

4、每個(gè)批次均提供檢驗(yàn)檢疫報(bào)告

5、適合各種常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)

6、干冰運(yùn)輸，建議存儲(chǔ)溫度為-20℃至-10℃

HAKATA無(wú)外泌體血清主要作用

提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng) 必須的物質(zhì)。

提供激素和各種生長(zhǎng)因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素、類固 醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血 小板生長(zhǎng)因子等。

提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪 、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用。

提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。

對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋 白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的 的使用血清來(lái)終止yi蛋白酶的消化作用。因?yàn)閥i蛋白酶已經(jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳 代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí) ，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們?cè)诖x解毒中起重要作用， 如SeO3,硒等 .

血清保存

血清應(yīng)保存在-5。C至-2O。C。若存放于4。C 時(shí)，保質(zhì)期減至一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi) ，再放回冷凍。

解凍血清

將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8。C冰箱使之溶解，然后在室溫下使 之全溶。但必須注意的是，溶解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

注意事項(xiàng)：

1、解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。

C至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20。C至37。C)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

2、解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生.

3、請(qǐng)勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。

4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。

5、若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56。C，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖 晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。 [5]血清解凍后發(fā) 現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?　欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離 心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。但不建議以過(guò)濾的方 法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜。

何謂熱滅活?

一般是以56C，30分鐘來(lái)處理已解凍的血清，因?yàn)榇思訜岵襟E，可以使補(bǔ)體去活化， 而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增 強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。

有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理 過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛?響了血清的質(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯 著的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是 "小黑點(diǎn)"，常常會(huì)讓研究者誤以為是血 清遭受污染，而把血清放在37C環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

HAKATA外泌體血清50ml

 胎牛血清（FBS）已在真核細(xì)胞培養(yǎng)中使用了幾十年了。然而，很少有人關(guān)注FBS的RNA對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生什么樣的生物學(xué)效應(yīng)。來(lái)自哈佛醫(yī)學(xué)院的研究人員用RNA測(cè)序，證明了FBS含有蛋白質(zhì)編碼和調(diào)控的多種RNA，包括mRNA、miRNA、rRNA和snoRNA等。它們中的大多數(shù)（>70％）仍然存在于細(xì)胞外囊泡（EV）和細(xì)胞間通訊研究中常使用的長(zhǎng)時(shí)間超速離心得到的無(wú)囊泡FBS（vesicle-depleted FBS, vdFBS）中。FBS相關(guān)的RNA會(huì)在分離細(xì)胞外膜泡RNA（exRNA）時(shí)一同被分離出來(lái)，這會(huì)對(duì)下游RNA分析造成干擾。許多進(jìn)化上保守的FBS源的RNA種類會(huì)被錯(cuò)誤地認(rèn)為是人或小鼠細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄本。

值得注意的是，在FBS中含量豐富的一些miRNAs，如miR-122、miR-451A和miR-1246，先前已被報(bào)道為在培養(yǎng)細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞外膜泡中富含的miRNAs，這可能是胎牛血清中miRNAs造成的假象。對(duì)公開(kāi)可用的exRNA數(shù)據(jù)庫(kù)的分析支持FBS污染的概念。此外，F(xiàn)BS轉(zhuǎn)錄本可被培養(yǎng)的細(xì)胞吸收，并影響高度敏感的基因表達(dá)譜技術(shù)的結(jié)果。因此，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過(guò)程中采取減少FBS源RNA干擾的預(yù)防措施是非常有必要的。

大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的需要在培養(yǎng)基中添加FBS，而FBS來(lái)源于胎牛血液，含有高豐度的牛外泌體。針對(duì)目的細(xì)胞分泌的外泌體研究時(shí)，這些牛外泌體可能會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生顯著的干擾，因此，需要通過(guò)無(wú)外泌體血清來(lái)解決此問(wèn)題。

 細(xì)胞在正常含血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定的時(shí)間后，細(xì)胞融合度約為60% - 70%時(shí)，移去原有含血清的培養(yǎng)基，換成新鮮的無(wú)外泌體血清培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48h左右，細(xì)胞融合度達(dá)到80%-95%左右時(shí)收取上清,該上清液即可用于提取外泌體。

無(wú)外泌體血清50ml

外泌體特指直徑在30-100nm的盤(pán)狀囊泡，其內(nèi)部包裹了多種蛋白質(zhì)、mRNA、non-coding RNA等分子。外泌體主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。目前大量文獻(xiàn)報(bào)道，幾乎所有類型的細(xì)胞都可以產(chǎn)生并釋放外泌體，不同的生物體液(血液、尿液、腦脊液、唾液、乳汁、腹水)中都發(fā)現(xiàn)有大量外泌體存在，外泌體由細(xì)胞分泌釋放后，通過(guò)個(gè)種體液在體內(nèi)傳播，被靶細(xì)胞攝入后，釋放內(nèi)部的生物分子，參與細(xì)胞間的通訊，調(diào)節(jié)細(xì)胞功能。

*，細(xì)胞不斷向細(xì)胞外空間分泌大量的小囊泡。這些小囊泡的直徑大多為50-200 nm，脂雙層結(jié)構(gòu)，介導(dǎo)了細(xì)胞間的運(yùn)輸。至于運(yùn)輸了什么，人們沒(méi)有太在意，大抵是一些不重要的蛋白吧。直到zui近，人們才發(fā)現(xiàn)他們錯(cuò)了。exosome及其他細(xì)胞外囊泡正起著*的細(xì)胞通訊作用。
   外泌體是包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm)。 所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。 有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物"和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開(kāi)始研究。 外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng)，無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā)。

無(wú)外泌體血清Exosome-free FBS，來(lái)自國(guó)外*胎牛血清，國(guó)內(nèi)技術(shù)水平生產(chǎn)，*。外泌體（exosome）及其他細(xì)胞外囊泡（EV）一直是不起眼的灰姑娘，而zui近診斷和治療潛力的發(fā)現(xiàn)，仿佛給這些小囊泡穿上了水晶鞋，使其一晃變成光彩奪目的公主。