CL-14細(xì)胞，CL-34細(xì)胞株收到貨時(shí)的注意事項(xiàng)

規(guī)格：1~3*106細(xì)胞/25cm2培養(yǎng)瓶

上海蒂科生物 細(xì)胞株、血清、培養(yǎng)基、 各種細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑，開學(xué)酬賓*中，更多產(chǎn)品，更大優(yōu)惠，敬請(qǐng)！！

1. 收到細(xì)胞株包裹時(shí)，請(qǐng)檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請(qǐng)立即通知。細(xì)胞株請(qǐng)盡速開始培養(yǎng)，或立即冷凍保存（置于-70 ℃，隔夜后，移到液氮）。

2. 冷凍細(xì)胞解凍程序：

2.1. 依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無(wú)法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之 血清種類，若因?qū)嶒?yàn)需要，必須有所不同時(shí)，務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成， 確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行所需之實(shí)驗(yàn)。

2.2. FBS （fetal bovine serum，胚牛血清），CS （calf serum，小牛血清）和HS （horse serum，馬血清），對(duì)細(xì)胞而言差異極大，請(qǐng)務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單之血清種類培養(yǎng)之。

2.3. 將培養(yǎng)基置于37 ℃ 水槽中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。取出冷凍管，立即放入37 ℃ 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過(guò)冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后，以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部， 移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。

2.4. 依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入37 ℃，5 % CO₂ 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2.5. 對(duì)絕大多數(shù)細(xì)胞而言，1 % 以下之冷凍保護(hù)劑DMSO，不會(huì)對(duì)細(xì)胞之貼附或活 化有不良影響，不需立刻由解凍細(xì)胞中去除， 待第二天確定細(xì)胞生長(zhǎng)或貼附良好后再去除即可。惟對(duì)極少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會(huì)造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需 立即去除DMSO 者， 則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中，離心300 xg （約1000 rpm），5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，再放入37 ℃，5 % CO₂ 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。收到T25 flask 細(xì)胞時(shí)，處理方式為：

2.5.1. 于寄送過(guò)程中，為避免起泡造成細(xì)胞脫落死亡，T25 flask 均加滿培養(yǎng)基。請(qǐng)檢查flask 外觀，并于顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況和有無(wú)污染現(xiàn)象，若有任何問(wèn)題，不要打開蓋子，請(qǐng)立即通知細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室。

2.5.2. 將原封之T25 flask 靜置于37 ℃，5 % CO₂ 培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞回溫至37 ℃，并讓運(yùn)送過(guò)程中少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長(zhǎng)。隔天后，于無(wú)菌操作箱內(nèi)取出flask 內(nèi)之培養(yǎng)基，（取出之培養(yǎng)基可以再使用），僅留約5-10ml 培養(yǎng)基于flask 內(nèi)，依一般培養(yǎng)方式再將細(xì)胞置入培養(yǎng)箱中，或細(xì)胞已長(zhǎng)滿盤， 則將細(xì)胞做傳代培養(yǎng)。