CL-40細胞，CMK細胞株收到貨的注意事項

規格：1~3*106細胞/25cm2培養瓶

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1. 收到細胞株包裹時，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養，或立即冷凍保存（置于-70 ℃，隔夜后，移到液氮）。

2. 冷凍細胞解凍程序：

2.1. 依據細胞株數據單之基礎培養基種類、血清種類和其它之成份和比例，制備培養基。絕大多數之細胞均無法立即適應不同之基礎培養基或不同之 血清種類，若因實驗需要，必須有所不同時，務必以緩慢比例漸次改變培養基組成， 確定細胞適應后，方進行所需之實驗。

2.2. FBS （fetal bovine serum，胚牛血清），CS （calf serum，小牛血清）和HS （horse serum，馬血清），對細胞而言差異極大，請務必依據細胞株資料單之血清種類培養之。

2.3. 將培養基置于37 ℃ 水槽中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。取出冷凍管，立即放入37 ℃ 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化后，以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部， 移入無菌操作臺內。

2.4. 依據細胞種類和濃度，于無菌操作臺內取10 ml 培養基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養基，混合均勻，放入37 ℃，5 % CO₂ 培養箱培養。

2.5. 對絕大多數細胞而言，1 % 以下之冷凍保護劑DMSO，不會對細胞之貼附或活 化有不良影響，不需立刻由解凍細胞中去除， 待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數因對DMSO 敏感或會造成細胞分化之細胞，需 立即去除DMSO 者， 則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養基中，離心300 xg （約1000 rpm），5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養基，將細胞均勻混合后，轉移至培養瓶中，再放入37 ℃，5 % CO₂ 培養箱培養。收到T25 flask 細胞時，處理方式為：

2.5.1. 于寄送過程中，為避免起泡造成細胞脫落死亡，T25 flask 均加滿培養基。請檢查flask 外觀，并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現象，若有任何問題，不要打開蓋子，請立即通知細胞實驗室。

2.5.2. 將原封之T25 flask 靜置于37 ℃，5 % CO₂ 培養箱中，使細胞回溫至37 ℃，并讓運送過程中少數脫落的細胞可再附著生長。隔天后，于無菌操作箱內取出flask 內之培養基，（取出之培養基可以再使用），僅留約5-10ml 培養基于flask 內，依一般培養方式再將細胞置入培養箱中，或細胞已長滿盤， 則將細胞做傳代培養。